Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病病征进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次再次出现肝细胞自身HIV到再次出现1标准型哮喘针灸症状的困难重重率在幼儿初期就有很好的详细描述，多个肝细胞自身HIV白血病的幼儿中所有70%在肝细胞转换后10年内患上哮喘，而随访15年的幼儿这一%减小到84%。相比较之下，占针灸1标准型哮喘一半以上的标准型1标准型哮喘的病症必要还并未赢取充分的数据研究。

更是加多的人开始常用分期系统对来定义1标准型哮喘的困难重重：个微在再次出现多种肝细胞自身HIV时转入第1收尾，再次出现血糖异常时转入第2收尾，再次出现症状时转入第3收尾。一些多发肝细胞自身HIV白血病的个微，在1期和2期，困难重重更是较慢，并持续发展为病症的1标准型哮喘。我们之前详细描述了一两组在首次验证到多种肝细胞自身HIV样本后至少10年无哮喘的极较慢困难重重者，这两组病征人数少，但相异之处十分明确。随后，我们发现肝细胞自身抗原免疫CD8+T细胞内底物在困难重重平稳的病征中所基本不共存，但在近期病症和依然共存的哮喘病征中所很十分容易验证到。这可能说明，与困难重重病征相比较，这些病征自身免疫底物的调节增强。

20世纪数据研究说明，尽管调节性T细胞内(Treg)数量经常性，但哮喘病征共存一些功能性缺陷，其中所以外对IL-2的底物意志力增加。此外，哮喘病征中所的效应CD4+T细胞内可能对调节增添抵抗性，展现出为效应T细胞内的抑止减较慢，自然显现出的Treg和游离显现出的可借Treg，以及抗原经历的CD4+T细胞内中所IL-2底物减较慢。本数据研究的目的是详细描述了CD4+调节性T细胞内(Treg)在一小群极平稳困难重重者中所的相异之处，他们的为数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX数据研究是一项以成年人为基础的纵向数据研究，在21岁所列就诊的病征亲属中所检查1标准型哮喘的危险环境因素。我们之前详细描述了依然平稳困难重重者的相异之处，他们保持多重肝细胞自身HIV白血病至少10年，但并未再次出现哮喘的针灸症状，较慢性或非性功能性自身免疫。随后，10名之前保持无哮喘并愿意提供大量血浆样本的平稳困难重重者纳入T和B细胞内功能性研究。在迄今的数据研究中所，8名较慢困难重重者(SP两组)，中所位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁密切关系的肝细胞自身HIV白血病。所有的与会者都西北面1标准型哮喘困难重重的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞自身HIV对某些抗原的白血病底物，然而，一名病征现在西北面2期至少6年，但并未再次出现针灸症状，一名病征被诊断为哮喘，该受试者72岁，在野外实验样本时，其HbA1c上升时到53 mmol/mol(7%)，在数据研究中所对该可借来进行了单独评估。转化外周血单个核底物细胞内(PBMCs)，选用多参数流式细胞内心法和T细胞内抑止试制评估可借中所Treg的阈值、表标准型和功能性。常用FlowSOM和CITRUS(聚类认定、连续性和重返)来进行无行政官员聚类研究，评估Treg表标准型。

结果：与身微健康可借相比较，来自较慢困难重重微的清醒CD4+T细胞内的行政官员聚类推断，应答的清醒CD4+ Treg阈值减小，与低剂量可借的TNFR相关蛋白(GITR)特别强调减小有关。一名HbA1c上升时的病征与困难重重平稳者和意味着的依此两组相比较，Treg小曲略有相异。功能性研究说明，与身微健康可借相比较，来自平稳困难重重微的Treg应答的CD4+效应T细胞内抑止相对来说毁损。展现出为对效应CD4+T细胞内CD25和CD134特别强调的抑止减小。

示意图1 深入的表标准型研究推断，CD4+Treg亚标准型在较慢困难重重函数调用中所减小。由FlowSOM转化的Treg会议室，聚集在来自所有可借的已逝CD4+CD45RA -细胞内上。根据记号物特别强调认定出10个元簇:清醒T细胞内_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T细胞内;HLA-DR + GITR +清醒T细胞内;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)常用9个相异Treg记号转化的10个元簇的MST。每个节点代表一个战斗群(100个战斗群)，更是大的元战斗群(10个元战斗群)在节点两组周围上色。每个节点中所的饼示意图问到单个记号的特别强调级别。(b)每个元聚类的热示意图，以推断整微记号特别强调。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)转化示意图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)一般来说轻元素为每个metacluster盒新线示意图(轻元素> 0.05%)相符为HD和SP两组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T细胞内(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T细胞内(l)。黄色圆圈代表ACSSP 606。**p< 0.01, Wilcoxon相加符号秩检验。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 常用CITRUS的预测模标准型证实，Treg阈值的减小是困难重重平稳的标志。分级制度门控(a - f)和棉花研究(g-k)比较SP与会者和意味着的HD与会者在CD4+CD45RA−T细胞内上的差异。(a)互补CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l族裔的特色示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3可溶性，然后通过HLA-DR和GITR特别强调来进行转化，模拟FlowSOM族裔。(b) HD(黑点)和SP(白点)两组以及可借SP 606(黄色)中所CD25+ cd127的阈值综合示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控三子集的盒新线示意图;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)经济作物簇臂由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3特别强调强度著色，箭头突出的簇被识别为SP和HD函数调用密切关系的相异。(j)盒新线示意图推断了在SP(白点)和HD(灰点)两组中所，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的一般来说轻元素(%)。(k)直方示意图推断每个簇的表标准型(黑色)和Treg记号一般来说特别强调与故事情节特别强调(深蓝色);上列，存储器Treg_3;上面悄悄，存储器Treg_4。故事情节与所有其他簇中所记号的特别强调有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon相加符号秩检验

示意图3 与身微健康献血者相比较，困难重重平稳者清醒treg的GITR减小。每个清醒CD4+T细胞内元簇(清醒T细胞内_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T细胞内;HLA-DR + GITR +清醒T细胞内;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个特别强调记号的改变。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的特别强调热示意图(sp606不以外在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇中所所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR特别强调联接，推断直方示意图(c)和综合示意图(d)。Wilcoxon相加符号秩和检验，p< 0.07(黄色)所有可借以外，p< 0.05(深蓝色)可借SP 606和意味着的HD不以外在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR特别强调，从分级制度门控，从所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(黄色)联接，推断直方示意图(e)和综合示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon相加符号秩检验

示意图4 来自平稳困难重重的CD4+ treg细胞内控制效应CD4+T细胞内的意志力增加。SP两组用深蓝色的新线和圆圈问到，HD两组用黑色的新线和圆圈问到，黄色的新线/圆圈问到可借sp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内来进行分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被记号为CFSE, Treg按观察的%滴定。用抗CD3 /28微珠还原细胞内，指导3天后来进行流式细胞内心法验证。(a-d)与CD4+反之亦然者一般来说应的treg指导(自微)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者指导。(a,b,f) CFSE裂解(a,e)和CFSE抑止一般而言(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止一般而言。常用白血病依此(应答的叛离细胞内不含treg)计算抑止一般而言。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

示意图5 效应CD4+T细胞内对平稳困难重重的T细胞内还原的抑止更是引人注目。SP两组用深蓝色的新线和圆圈问到，HD两组用黑色的新线和圆圈问到，黄色的新线/圆圈问到可借sp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内来进行分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel记号，treg按观察的%滴定。用抗CD3 /28微珠还原细胞内，指导3天后来进行流式细胞内心法(CD25反染)和细胞内因三子研究。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者主导指导。(a,b) CFSE裂解(a)和CFSE抑止调升(b)。(c,d) CD25抑止调升(c)和CD134抑止调升(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导中所的特别强调。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自平稳困难重重三子的还原清醒CD4+Treg在GITR特别强调中所赢取了扩展和比较丰富，特别强调了进一步数据研究Treg在1标准型哮喘危险性个微中所的差异性的必要性。

原意出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28